HPLC高(gao)效液(ye)相(xiang)色(se)譜檢測儀(yi)是應(ying)用高(gao)效液(ye)相(xiang)色(se)譜原(yuan)理，主要用於(yu)分析(xi)高(gao)沸點(dian)不易揮(hui)發的、受熱不穩定的和分子(zi)量大的有機(ji)化合(he)物的儀(yi)器設備(bei)。它由儲液(ye)器、泵、進(jin)樣(yang)器、色譜柱(zhu)、檢測器、記錄儀(yi)等幾(ji)部(bu)分組成。
 

　　儲液(ye)器中的流動相被高(gao)壓(ya)泵打入系統，樣(yang)品(pin)溶(rong)液經(jing)進(jin)樣(yang)器進(jin)入流動相，被流(liu)動相載入色譜柱(zhu)(固(gu)定相) 內(nei)，由於(yu)樣(yang)品(pin)溶(rong)液中的各組分在(zai)兩(liang)相中具有不同的分配系數，在(zai)兩(liang)相中做(zuo)相對運(yun)動時，經過(guo)反(fan)復(fu)多(duo)次的吸附- 解(jie)吸的分配過(guo)程(cheng)，各組分在(zai)移(yi)動速(su)度上(shang)產生(sheng)較(jiao)大的差別(bie)，被分離成單(dan)個組分依(yi)次從(cong)柱(zhu)內(nei)流出(chu)，通過(guo)檢測器時，樣(yang)品(pin)濃度被轉(zhuan)換(huan)成電(dian)信號(hao)傳(chuan)送到記錄儀(yi)，數據以圖譜形(xing)式打印(yin)出(chu)來(lai)。HPLC廣泛應(ying)用於(yu)生命(ming)科(ke)學、食品(pin)科(ke)學、藥物研究(jiu)以及環(huan)境研究(jiu)中。
 

　　儲液(ye)器中的流動相被高(gao)壓(ya)泵打入檢測系(xi)統，樣(yang)品(pin)溶(rong)液經(jing)進(jin)樣(yang)器進(jin)入流動相，被流(liu)動相載入色譜柱(zhu)(固(gu)定相)內(nei)，由於(yu)樣(yang)本(ben)溶(rong)液中的各組分在(zai)兩(liang)相中具有不同的分配系數，在(zai)兩(liang)相中作相(xiang)對運(yun)動時，經過(guo)反(fan)復(fu)多(duo)次的“吸附-解(jie)吸”的分配過(guo)程(cheng)，各組分在(zai)移(yi)動速(su)度上(shang)產生(sheng)較(jiao)大的差別(bie)，被分離成單(dan)個組分依(yi)次從(cong)柱(zhu)內(nei)流出(chu)，通過(guo)檢測器時，樣(yang)本(ben)濃度被轉(zhuan)換(huan)成電(dian)信號(hao)傳(chuan)送到記錄儀(yi)，數據以圖譜形(xing)式輸出(chu)檢測結(jie)果(guo)。
 

　　根據分離機制的不同，HPLC原(yuan)理可分為液(ye)固吸附色譜法(fa)、液(ye)液分配色譜法(fa)(正(zheng)相與(yu)反(fan)相(xiang))、離子(zi)交(jiao)換(huan)色(se)譜法(fa)及分子(zi)排阻色(se)譜法(fa)。
 

　　1. 液(ye)固吸附色譜法(fa)
 

　　液(ye)固吸附色譜法(fa)中，固定相為固(gu)體吸附劑，根(gen)據各組分吸附能(neng)力差異(yi)而使(shi)組(zu)分得(de)以分離。常(chang)用的吸附劑為矽(gui)膠(jiao)或氧化(hua)鋁，大多(duo)數用於(yu)非離(li)子(zi)型(xing)化(hua)合(he)物。吸附色譜固(gu)定相可以分為極性和(he)非(fei)極性兩(liang)大類(lei)。對流動相的要求(qiu)為：
 

　　1) 選(xuan)用的溶(rong)劑應(ying)當與(yu)固(gu)定相互(hu)不相溶(rong)，並能(neng)保持(chi)色(se)譜柱(zhu)的穩定性。
 

　　2) 選(xuan)用的溶(rong)劑應(ying)有高(gao)純(chun)度，以防所(suo)含微(wei)量雜質(zhi)在(zai)柱中積累，引(yin)起(qi)柱性能(neng)的改(gai)變。
 

　　3) 選(xuan)用的溶(rong)劑性能(neng)應(ying)與(yu)所(suo)使(shi)用的檢測器相匹(pi)配，如果(guo)使(shi)用紫(zi)外(wai)吸收檢測器，就不能(neng)選(xuan)用在(zai)檢測波(bo)長(chang)下(xia)有紫(zi)外(wai)吸收的溶(rong)劑;若(ruo)使(shi)用示(shi)差折(zhe)光(guang)檢測器，就不能(neng)用梯(ti)度洗脫。
 

　　4) 選(xuan)用的溶(rong)劑應(ying)對樣(yang)品(pin)有足夠的溶(rong)解(jie)能(neng)力，以提高(gao)測(ce)定的靈(ling)敏度。
 

　　5) 選(xuan)用的溶(rong)劑應(ying)具有(you)低的黏(nian)度和(he)適當(dang)低的沸點(dian)。
 

　　6) 應(ying)盡(jin)量避(bi)免(mian)使(shi)用具(ju)有(you)顯著毒(du)性的溶(rong)劑，以保證(zheng)工(gong)作人員的安全(quan)。
 

　　液固(gu)色(se)譜法(fa)是(shi)以表面吸附性能(neng)力為依(yi)據的，所(suo)以它常(chang)用於(yu)分離極性不同的化合(he)物，也能(neng)分離那些具(ju)有(you)相(xiang)同極性基(ji)團，但(dan)數量不同的樣(yang)品(pin)。
 

　　2. 液液分配色譜法(fa)
 

　　固(gu)定相為液(ye)體，根據被分離的組分在(zai)流動相和固(gu)定相中的溶(rong)解(jie)度不同而(er)分離。依(yi)固定相和(he)流動相的極性不同可分為正(zheng)相色(se)譜法(fa)和(he)反(fan)相(xiang)色譜法(fa)。正(zheng)相色(se)譜法(fa)采(cai)用極性固(gu)定相，流(liu)動相為相(xiang)對非極性的疏水性溶(rong)劑，常(chang)用於(yu)分離中等極性和(he)極性較(jiao)強的化合(he)物;反(fan)相(xiang)色譜法(fa)壹般用非(fei)極性固(gu)定相，流(liu)動相為水或緩(huan)沖(chong)溶(rong)液，適用於(yu)分離非極性和(he)極性較(jiao)弱的化合(he)物。其(qi)中，反(fan)相(xiang)色譜應(ying)用廣(guang)。
 

　　3. 離(li)子(zi)交(jiao)換(huan)色(se)譜法(fa)
 

　　固(gu)定相是(shi)離子(zi)交(jiao)換(huan)樹脂(zhi)。樹脂(zhi)上(shang)可電離離子(zi)與(yu)流(liu)動相中具有相(xiang)同(tong)電荷的離子(zi)及被測(ce)組(zu)分的離子(zi)進(jin)行交(jiao)換(huan)，根(gen)據各離子(zi)與(yu)離(li)子(zi)交(jiao)換(huan)基(ji)團具有(you)不同的電荷吸引力(li)而分離。
 

　　4. 分子(zi)排阻色(se)譜法(fa)
 

　　分子(zi)排阻色(se)譜法(fa)又(you)稱(cheng)凝(ning)膠(jiao)色(se)譜法(fa)，它(ta)是按(an)照分子(zi)尺(chi)寸(cun)大小(xiao)順(shun)序進(jin)行分離的壹種色譜方(fang)法(fa)。分子(zi)排阻色(se)譜法(fa)的固定相凝(ning)膠(jiao)是(shi)壹種多(duo)孔(kong)性的聚合(he)材料，有(you)壹定的形(xing)狀和穩定性，利(li)用分子(zi)篩對分子(zi)量大小(xiao)不同的各組分排阻能(neng)力的差異(yi)而完(wan)成分離。根據所(suo)用流(liu)動相的不同，凝(ning)膠(jiao)色(se)譜法(fa)可以分為兩(liang)類(lei)：即(ji)用水溶(rong)劑做(zuo)流動相的凝(ning)膠(jiao)過(guo)濾(lv)色譜法(fa)(GFC)與(yu)用有(you)機(ji)溶(rong)劑如(ru)四(si)氫(qing)呋喃做(zuo)流動相的凝(ning)膠(jiao)滲(shen)透色譜法(fa)(GPC)。